术前准备

术前签署知情同意书，标记需治疗的畸形范围，标准照相存档；采用美容石膏面膜或橡皮泥塑形排水法估计软组织缺损量。

ADSCs的获取与分离

常规吸脂或切脂取材，以100ml纯脂肪量为1个单位治疗剂量，根据软组织缺损程度，决定单位治疗剂量数，即刻送干细胞分离室进行脂肪干细胞消化、分离、提取。

ADSCs提取程序：脂肪组织混合物以生理盐水清洗，加入无菌胶原酶液，充分振荡混匀，恒温振荡箱内消化、离心。离心后液体，由上至下分为脂肪层、生理盐水层、沉淀层(含干细胞成分)，将沉淀层筛网过滤后，加入适量生理盐水。应用淋巴细胞分离液以梯度离心法进一步分离、纯化干细胞。在新的离心管中加入淋巴细胞分离液30ml，将细胞悬液贴壁缓缓加入淋巴细胞分离液上层，可见悬液与淋巴细胞分离液之间清晰界面。离心1000r／min，15min，可见液体分为生理盐水层、单核细胞分离液层、红细胞沉淀层。用细移液管吸取单核细胞分离液层，加入另一新离心管当中。向离心管中加入生理盐水，离心洗涤3次(1000r／min，5min)。将上述步骤提取的含ADSCs的单个核细胞悬浮于生理盐水中，采用活细胞计数仪计数，通常细胞浓度在（2～20）×107/ml，备用。每次分离后，另取少量细胞进行台盼蓝染色检测活细胞比率，并常规行细菌培养。

颗粒脂肪组织纯化：将剩余脂肪组织混合物以生理盐水漂洗、离心。离心后的液体由上至下分为油脂层、脂肪层、生理盐水层、沉淀层(含大量血细胞成分)。收集脂肪层加入等量生理盐水，混匀，离心。离心液体由上至下分为脂肪层、生理盐水层、沉淀层。收集脂肪层中颗粒脂肪组织，备用。

CAL移植物形成：将含有ADSCs悬液与颗粒脂肪组织混合，静置30min，使ADSCs与颗粒脂肪充分附着，形成CAL移植物。

CAL操作

受区皮下脂肪层行局部浸润麻醉或区域阻滞麻醉。取隐蔽或微创切口，使切口相互垂直，皮下脂肪层分离疏松网格状隧道；层次在皮下脂肪与颧、颊纤维脂肪垫间，睑周、口周受区分离方向尽量保持与血管、神经平行；受区分离时，注意勿分离过浅，以免造成术后凹凸不平；分离勿深及肌肉层，以防损伤或压迫面神经。受区处理完毕后，应用螺旋推进注射器在受区均匀推注，切勿粗暴高压注射，注意中央部位与边缘部位之间平滑过渡，其中央部位应适当多填充，尽量使移植物均匀分布于凹陷部位。对特殊细微部位可行多层面、多隧道、多点注射, 受植床应尽量选择血运良好的组织层面。注射完毕后，拔出针头，压住针孔(若有切口应缝合),并轻轻揉压注射部位，抚平受区，局部塑形包扎，压力应适度。

术后处理

受区制动1周，减少或避免移植区周围肌肉的活动，防止移植脂肪中新生血管的损伤；术后3个月内，面部避免阳光曝晒和局部按摩。术后定期随访、照相，与术前进行对比。评价标准分为完美效果（症状完全消失）、明显改善(原有症状消失或明显减轻)、有效(原有症状部分消失，需重复治疗)和无效(原有症状无变化)。评价结果的标准包括表情是否自然,以及患者自我感觉舒适度等。B超、MRI检查有无硬结、皮下包块、囊肿、坏死变性等并发症。患者主观评价：定期随访，评价标准分为满意(自觉改善明显，效果持久)、有效(自觉有部分改善)、不满意(自觉无明显改善或改善维持时间过短)。

ADSCs是存在于脂肪组织中的间充质干细胞,具有多向分化的潜能。其优点：①脂肪组织储量丰富，来源充足，取材量大，能反复取材；②组织获取可通过吸脂术等方法完成，不会给患者造成二次损伤；③脂肪组织中干细胞含量丰富，高于骨髓中干细胞500倍；④属自体移植，无免疫排斥反应；⑤不涉及医学伦理学问题。因此，ADSCs成为组织再生和修复的理想细胞来源。但干细胞单纯移植时，绝大多数都被单核巨噬细胞吞噬，只有约10%的干细胞能存活下来，因此，低下的存活率成为限制其疗效的关键。有研究表明，将ADSCs与成熟脂肪细胞共同培养时，可以出现向脂肪细胞分化。Matsumoto等认为，缺乏干细胞的游离脂肪组织，在移植后产生的脂肪吸收、细胞凋亡等现象，可通过增加其中的ADSCs数目来改善，并提出了ADSCs辅助CAL的理论。该技术的优点：①ADSCs作为脂肪细胞贮备能直接转化为脂肪细胞，进而形成脂肪组织，以补偿部分成熟脂肪细胞的逐渐吸收；②直接转化成为内皮细胞，促进再血管化，从而增加移植组织的血供，降低移植物的吸收率；③ADSCs产生和分泌多种促血管化的细胞因子，诱导血管再生；④减少缺血再灌注损伤，保护移植物；⑤促进受区伤口愈合。临床上，CAL技术已应用于部分乳房切除术后乳房再造、隆乳以及半侧颜面萎缩的治疗，效果理想。

研究证实，ADSCs在移植术后2个月，其活性明显增强，临床修复效果会在术后3个月后更明显，所以，术后疗效观察时限应延长至半年，根据患者的术后恢复情况，决定是否行再次治疗，序贯治疗间隔时限至少为6个月。本研究的欠缺点在于病例的样本量较少，缺乏更为客观的组织学证据，因此，ADSCs的蕞佳治疗浓度尚需探讨。

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